<<
>>

Углеводы

Для получения полисахаридных фракций нами использован шрот по­сле спиртового экстрагирования побегов багульника болотного, собранного в окрестностях г. Ярославль. Полисахариды выделяли по известной методике [162].

Воздушно-сухой шрот массой 145 г помещали в колбу, заливали 5100 мл воды и кипятили 18 часов. Затем извлечение сливали, отжимали шрот. Всего получено 2150 мл водного извлечения, которое концентрировали вы­париванием на водяной бане до 200 мл. Полисахариды осаждали 1000 мл 96% этилового спирта. Осадок отделяли фильтрованием через складчатый бумажный фильтр. Очистку полисахаридов проводили путем повторного осаждения спиртом в соотношении 1:5, предварительно растворив их в 200 мл горячей воды. После очистки получили 6,3 г водорастворимой фракции (выход 4,32%). Шрот высушивали на воздухе.

Для выделения пектиновых веществ 100 г шрота заливали 4000 мл сме­си, состоящей из 0,5% растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1). Шрот кипятили в течение 12 часов. Сливали извлечение (2000 мл), за­тем концентрировали, выпаривая на водяной бане до 200 мл. Пектиновые вещества осаждали 96% этиловым спиртом в соотношении 1:5. Осадок от-

- 42 -

делили фильтрованием через складчатый бумажный фильтр. После высу­шивания масса пектиновых веществ составила 5,83 г (выход 5,83%). Шрот высушивали на воздухе. Его остаток равнялся 87,5 г.

Для изучения качественного состава полисахаридов около 50 мг их фракций помещали в ампулу, прибавляли 5 мл 2н раствора кислоты серной и содержимое нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 2 часов. Ампулу охлаждали, вскрывали, реакционную смесь нейтрализовали по универсальному индикатору, переносили в чашку и упаривали досуха. Сухой остаток растворяли в 3 мл 96% этанола. Гидролизат в количестве 0,02-0,05 мл наносили на хроматографическую бумагу. В качестве систем растворителей использовали этилацетат-пиридин-воду (2:1:2) и н-бутанол- уксусную кислоту-воду (5:1:2), для доказательства наличия уроновых кислот - восходящую БХ в системе растворителей этилацетат-уксусная кислота- муравьиная кислота-вода (18:3:1:4).

Для более четкого разделения моносаха­ридов применяли двух-, трех- и более кратное хроматографирование, при­чем, после каждого пропускания растворителя, он удалялся с хроматограм­мы высушиванием на воздухе. В качестве образцов сравнения использова­ли спиртовые растворы арабинозы, ксилозы, галактозы, глюкозы, рамнозы, фруктозы, глюкуроновой и галактуроновой кислот.

, Моносахариды проявляли обработкой раствором анилинфталата в н- бутаноле (100 мл н-бутанола, насыщенного водой, 0,93 г анилина, 1,66 г фталевой кислоты). После опрыскивания хроматограмму нагревали в су­шильном шкафу при 110-115°С в течение 7-10 минут [65,207]. Результаты хроматографирования представлен в таблицах 2.3, 2.4.

Обобщая данные проведенных нами исследований, отметили, что каче­ственный состав водорастворимых полисахаридов (ВРПС) и пектинов раз­личный. Фракция ВРПС представлена шестью моносахарами (фруктоза, рам­ноза, ксилоза, глюкоза, галактоза, арабиноза), а в гидролизате пектиновых веществ мы выявили всего два сахара - галактозу и ксилозу. Кислые сахара, которые представлены галактуроновой и глюкуроновой кислотами, нами об-

Таблица 2.3

Хроматографический анализ моносахаров гидролизата полисахаридов побегов багульника болотного

Продукты ней­тральной фрак­ции Значение

Rf

Окраска пятен по­сле проявления Достоверный

свидетель

Значение

Rf

н-бутанол-уксусная кислота-вода, 4:1:2
Вещество 1 0,319 Коричнево-желтая Фруктоза 0,323
Вещество 2 0,571 Коричнево-желтая Рамноза 0,566
Вещество 3 0,404 Розовая Ксилоза 0,400
Вещество 4 - - Глюкоза 0,266
Вещество 5 0,219 Коричнево-желтая Галактоза 0,228
Вещество 6 - . - Арабиноза 0,342
этилацетат - пиридин - вода, 2:1:2
Вещество 1 0,576 Коричнево-желтая Фруктоза 0,613
Вещество 2 0,790 Коричнево-желтая Рамноза 0,800
Вещество 3 0,674 Розовая Ксилоза 0,669
Вещество 4 0,502 Коричнево-желтая Глюкоза 0,525
Вещество 5 - - Галактоза 0,451
Вещество 6 0,581 Розовая Арабиноза 0,595

Таблица 2.4

Хроматографический анализ моносахаров гидролизата пектиновых веществ побегов багульника болотного

Продукты ней­тральной фрак­ции Значение

Rf

Окраска пятен по­сле проявления Достоверный

свидетель

Значение

Rf

н-бутанол - уксусная кислота - вода, 4:1:2
Вещество 1 - - Глюкоза 0,342
Вещество 2 0,271 Коричнево-желтая Г алактоза 0,276
Вещество 3 - - Арабиноза 0,400
Вещество 4 - - Рамноза 0,619
Вещество 5 0,438 Розовая Ксилоза 0,452
Вещество 6 ■ - - Фруктоза 0,419
этилацетат - пиридин - вода, 2:1:2
Вещество 1 - - Глюкоза 0,502
Вещество 2 0,440 Коричнево-желтая Галактоза 0,431
Вещество 3 ■ - - Арабиноза 0,568
Вещество 4 - - Рамноза 0,791
Вещество 5 0,617 Коричнево-желтая Ксилоза 0,631
Вещество 6 - - Фруктоза 0,556

наружены в обеих фракциях (табл. 2.5).

Для количественного определения нейтральных сахаров использовали известную методику [28,49]. При этом около 50 мг (точная навеска) фракции полисахаридов помещали в ампулу, прибавляли 5 мл 10% раствора серной кислоты, ампулу запаивали и нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 1 часа. Ампулу охлаждали, реакционную смесь нейтрализо­вали бария карбонатом по универсальному индикатору, переносили в мер­ную колбу на 25 мл и доводили водой до метки (раствор А). В колбу вмести­мостью 50 мл вносили 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1,0 мл раствора А и нагревали на кипящей водя­ной бане в течение 10 мин, охлаждали и содержимое количественно перено­сили в мерную колбу вместимостью 25 мл, раствор доводили до метки водой. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 460 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве контрольного раствора применяли смесь, состоящую из 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1,0 мл воды. Смесь нагревали на водяной бане в течение 10 мин и доводили до метки во­дой в мерной колбе на 25 мл. Количественное содержание нейтральных са­харов рассчитывали по формуле [57,60,223,253]:

Dx х 25 х 25 х Сст.

X, %=------------------------------------------- :, где

DCT. х а х 1,0

Dx - оптическая плотность исследуемого раствора, Dcr - оптическая плот­ность стандартного раствора, Сст. - концентрация стандартного раствора, а - навеска сырья в граммах.

В качестве стандартного раствора использовали 0,0024% раствор глюкозы.

Результаты количественного определения нейтральных сахаров при­ведены в таблице 2.5.

Для количественного определения кислых сахаров около 50 мг (точная навеска) фракций полисахаридов растворяли в 70 мл 0,1н раствора натрия гидроксида в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили 0,1н раствором NaOH до метки (исследуемый раствор).

В пробирку помещали 0,4 мл иссле-

Таблица 2.5

Результаты качественного обнаружения и количественного определения полисахаридов побегов багульника болотного

Фрак­

ция

полиса­

харидов

Описа­

ние

ком­

плекса

Раствори­

мость

Золь­

ность

Состав

моносаха­

ридов

Содержание полисахаридов
Выход, % от воздушно­сухого сырья Моносахаридов,

% от навески

кислых восстанавли­

вающих

Водо­

раство­

римые

Аморф­ный поро­шок ко­ричне­вого

цвета

Умеренно раствори­мый в воде 10,239 Галактоза, глюкоза, фруктоза, рамноза, кси­лоза, арабино­за, галактуро­новая и глю-

куроновая ки­слоты

4,32 25,771 11,277
Пекти­

ны

Аморф­

ный

поро­

шок

кремо­

вого

цвета

Мало рас­творим в воде с об­разованием

желтого

опалесци­

рующего

раствора

2,978 Г алактоза, ксилоза, га­лактуроновая и глюкуроно-

вая кислоты

5,83 14,765 17,834

дуемого раствора, прибавляли 0,25 мл 0,5% раствора карбазола и 5,5 мл кон­центрированной серной кислоты. Смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения измеряли оптическую плотность на спектрофотометре СФ-46 при длинах волн 490 и 420 нм в кюветах с толщи­ной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения применяли смесь, состоящую из 0,5 мл воды, 0,25 мл раствора карбазола и 5,5 мл концентрированной сер­ной кислоты. Содержание кислых сахаров рассчитывали по формуле [978]:

AD х ЮО х 6,25

X =------------------------------------------------------------- , где

а х 0,4 х 563

AD - разность значений оптической плотности растворов при длине волны 490 и 420 нм; а - навеска полисахарида, г; 563 - условный удельный показа­тель поглощения галактуроновой кислоты.

Результаты количественного определения кислых сахаров отражены в таблице 2.5.

Для определения золы около 1 г полисахарида (точная навеска) поме­

щали в предварительно прокалённый и точно взвешенный фарфоровый ти­гель, равномерно распределяя вещество по дну. Затем тигель осторожно нагревали, давая порошку сгореть при возможно более низкой температуре; после того, как уголь сгорит почти полностью, увеличивали температуру.

Прокаливали при слабом красном калении (около 500°С) до постоян­ной массы, избегая сплавления золы и спекания её со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждали в эксикаторе и взвешивали.

Результаты определения приведены в таблице 2.5.

В ходе исследования шрота побегов багульника, заготовленного в ок­рестностях г. Ярославль, нами выделена фракция водорастворимых полиса­харидов и фракция пектинов. Их выход равнялся 4,32 и 5,83% соответствен­но. При количественном определении установлено, что содержание восста­навливающих сахаров в гидролизате водорастворимой фракции составило 11,28%, а в гидролизате фракции пектинов - 17,83%, содержание кислых са­харов - 25,77 и 14,77% соответственно (табл. 2.5).

Мы отметили некоторые различия в результатах качественного и коли­чественного анализа полисахаридных фракций багульника, заготовленного в Сибири и в Ярославской области. Так, в отличие от данных, полученных М.В. Белоусовым с соавторами [162], нами во фракции ВРПС обнаружена фруктоза и галактуроновая кислота, но не установлено наличие маннозы. Также отмечено меньшее содержание кислых и большее нейтральных саха­ров в обеих фракциях. Возможно, это связано с влиянием географических факторов и условий произрастания растения.

1.3.

<< | >>
Источник: КОРОТАЕВА МАРИНА СЕРГЕЕВНА. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЧЕТЫРЕХ ВИДОВ РОДА LEDUM L. Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. Ярославль - 2006. 2006

Скачать оригинал источника

Еще по теме Углеводы:

  1. Лекция 3: ЛЕЧЕНИЕ САХАРНОГО ДИАБЕТА
  2. 0067 ОБМЕН ЛИПИДОВ
  3. 0068 ОБМЕН УГЛЕВОДОВ
  4. 50.Обмен углеводов
  5. Изменения углеводов в организме.
  6. Б) Регуляция обмена углеводов.
  7. 50.Обмен углеводов..doc
  8. С) Пищевые вещества.
  9. Всасывание углеводов.
  10. 38. Питание как фактор здоровья. Физиологические нормы питания. Понятие об основных принципах рационального питания.
  11. 39. Биологические и экологические проблемы питания. Концепции и принципы рационального питания.
  12. 42. Анализ различных теорий питания (вегетарианства, сыроедения, голодания, раздельного питания и др.)
  13. 47. Простые и сложные углеводы, их источники, гигиеническое значение. Понятие о рафинированных продуктах и «защищенных» углеводах.
  14. 56. ПРИНЦИПЫ ЛЕЧЕБНОГО ПИТАНИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЧЕБНЫХ ДИЕТ. Организация лечебного питания.
  15. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  16. 62. РОЛЬ БЕЛКОВ, ЖИРОВ, УГЛЕВОДОВ В ПИТАНИИ.
- Акушерство и гинекология - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология и гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия - Инфекционные заболевания - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы и аппараты - Медицинское материаловедение - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Невропатология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Основы медицины - Оториноларингология - Офтальмология - Паллиативная медицина - Патологическая анатомия - Патологическая физиология - Педиатрия - Профессиональные болезни - Психиатрия и наркология - Пульмонология - Ревматология - Социальная медицина - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология и ортопедия - Урология - Фармакология - Фармацевтика - Физиология человека - Фтизиатрия - Хирургия - Эндокринология - Эпидемиология -