Углеводы

Для получения полисахаридных фракций нами использован шрот по­сле спиртового экстрагирования побегов багульника болотного, собранного в окрестностях г. Ярославль. Полисахариды выделяли по известной методике [162].

Для выделения пектиновых веществ 100 г шрота заливали 4000 мл сме­си, состоящей из 0,5% растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1). Шрот кипятили в течение 12 часов. Сливали извлечение (2000 мл), за­тем концентрировали, выпаривая на водяной бане до 200 мл. Пектиновые вещества осаждали 96% этиловым спиртом в соотношении 1:5. Осадок от-

- 42 -

делили фильтрованием через складчатый бумажный фильтр. После высу­шивания масса пектиновых веществ составила 5,83 г (выход 5,83%). Шрот высушивали на воздухе. Его остаток равнялся 87,5 г.

Для изучения качественного состава полисахаридов около 50 мг их фракций помещали в ампулу, прибавляли 5 мл 2н раствора кислоты серной и содержимое нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 2 часов. Ампулу охлаждали, вскрывали, реакционную смесь нейтрализовали по универсальному индикатору, переносили в чашку и упаривали досуха. Сухой остаток растворяли в 3 мл 96% этанола. Гидролизат в количестве 0,02-0,05 мл наносили на хроматографическую бумагу. В качестве систем растворителей использовали этилацетат-пиридин-воду (2:1:2) и н-бутанол- уксусную кислоту-воду (5:1:2), для доказательства наличия уроновых кислот - восходящую БХ в системе растворителей этилацетат-уксусная кислота- муравьиная кислота-вода (18:3:1:4).

, Моносахариды проявляли обработкой раствором анилинфталата в н- бутаноле (100 мл н-бутанола, насыщенного водой, 0,93 г анилина, 1,66 г фталевой кислоты). После опрыскивания хроматограмму нагревали в су­шильном шкафу при 110-115°С в течение 7-10 минут [65,207]. Результаты хроматографирования представлен в таблицах 2.3, 2.4.

Обобщая данные проведенных нами исследований, отметили, что каче­ственный состав водорастворимых полисахаридов (ВРПС) и пектинов раз­личный. Фракция ВРПС представлена шестью моносахарами (фруктоза, рам­ноза, ксилоза, глюкоза, галактоза, арабиноза), а в гидролизате пектиновых веществ мы выявили всего два сахара - галактозу и ксилозу. Кислые сахара, которые представлены галактуроновой и глюкуроновой кислотами, нами об-

Таблица 2.3

Хроматографический анализ моносахаров гидролизата полисахаридов побегов багульника болотного

Таблица 2.4

Хроматографический анализ моносахаров гидролизата пектиновых веществ побегов багульника болотного

наружены в обеих фракциях (табл. 2.5).

Для количественного определения нейтральных сахаров использовали известную методику [28,49]. При этом около 50 мг (точная навеска) фракции полисахаридов помещали в ампулу, прибавляли 5 мл 10% раствора серной кислоты, ампулу запаивали и нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 1 часа. Ампулу охлаждали, реакционную смесь нейтрализо­вали бария карбонатом по универсальному индикатору, переносили в мер­ную колбу на 25 мл и доводили водой до метки (раствор А). В колбу вмести­мостью 50 мл вносили 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1,0 мл раствора А и нагревали на кипящей водя­ной бане в течение 10 мин, охлаждали и содержимое количественно перено­сили в мерную колбу вместимостью 25 мл, раствор доводили до метки водой. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 460 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве контрольного раствора применяли смесь, состоящую из 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1,0 мл воды. Смесь нагревали на водяной бане в течение 10 мин и доводили до метки во­дой в мерной колбе на 25 мл. Количественное содержание нейтральных са­харов рассчитывали по формуле [57,60,223,253]:

D_x х 25 х 25 х С_ст.

X, %=------------------------------------------- _:, где

D_CT. х а х 1,0

D_x - оптическая плотность исследуемого раствора, D_cr - оптическая плот­ность стандартного раствора, С_ст. - концентрация стандартного раствора, а - навеска сырья в граммах.

В качестве стандартного раствора использовали 0,0024% раствор глюкозы.

Результаты количественного определения нейтральных сахаров при­ведены в таблице 2.5.

Для количественного определения кислых сахаров около 50 мг (точная навеска) фракций полисахаридов растворяли в 70 мл 0,1н раствора натрия гидроксида в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили 0,1н раствором NaOH до метки (исследуемый раствор).

Таблица 2.5

Результаты качественного обнаружения и количественного определения полисахаридов побегов багульника болотного

дуемого раствора, прибавляли 0,25 мл 0,5% раствора карбазола и 5,5 мл кон­центрированной серной кислоты. Смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения измеряли оптическую плотность на спектрофотометре СФ-46 при длинах волн 490 и 420 нм в кюветах с толщи­ной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения применяли смесь, состоящую из 0,5 мл воды, 0,25 мл раствора карбазола и 5,5 мл концентрированной сер­ной кислоты. Содержание кислых сахаров рассчитывали по формуле [978]:

AD х ЮО х 6,25

X =------------------------------------------------------------- , где

а х 0,4 х 563

AD - разность значений оптической плотности растворов при длине волны 490 и 420 нм; а - навеска полисахарида, г; 563 - условный удельный показа­тель поглощения галактуроновой кислоты.

Результаты количественного определения кислых сахаров отражены в таблице 2.5.

Для определения золы около 1 г полисахарида (точная навеска) поме­

щали в предварительно прокалённый и точно взвешенный фарфоровый ти­гель, равномерно распределяя вещество по дну. Затем тигель осторожно нагревали, давая порошку сгореть при возможно более низкой температуре; после того, как уголь сгорит почти полностью, увеличивали температуру.

Прокаливали при слабом красном калении (около 500°С) до постоян­ной массы, избегая сплавления золы и спекания её со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждали в эксикаторе и взвешивали.

Результаты определения приведены в таблице 2.5.

В ходе исследования шрота побегов багульника, заготовленного в ок­рестностях г. Ярославль, нами выделена фракция водорастворимых полиса­харидов и фракция пектинов. Их выход равнялся 4,32 и 5,83% соответствен­но. При количественном определении установлено, что содержание восста­навливающих сахаров в гидролизате водорастворимой фракции составило 11,28%, а в гидролизате фракции пектинов - 17,83%, содержание кислых са­харов - 25,77 и 14,77% соответственно (табл. 2.5).

Мы отметили некоторые различия в результатах качественного и коли­чественного анализа полисахаридных фракций багульника, заготовленного в Сибири и в Ярославской области. Так, в отличие от данных, полученных М.В. Белоусовым с соавторами [162], нами во фракции ВРПС обнаружена фруктоза и галактуроновая кислота, но не установлено наличие маннозы. Также отмечено меньшее содержание кислых и большее нейтральных саха­ров в обеих фракциях. Возможно, это связано с влиянием географических факторов и условий произрастания растения.

1.3.