Хроматографический анализ

Мы провели хроматографический анализ матричной настойки в тонких слоях сорбента, восходящей и нисходящей одномерной, а также двумерной

хроматографией на бумаге [219].

При предварительном исследовании обнаружили, что настойка из по­бегов багульника, собранных в Республике Коми, отличалась более богатым фенольным комплексом при хроматографировании, поэтому именно ее ис­пользовали для более подробного изучения.

Двумерное хроматографирование матричной настойки осуществляли на квадратном листе бумаги Filtrak FN-4 размером 26x26 см. Настойку нано­сили капилляром (50 касаний) на диагональ квадрата вблизи одного из его углов. Первое направление проводили в системе н-бутанол-уксусная кислота- вода (4:1:2), второе — в системе 15% уксусная кислота. После хроматографи­рования в первом направлении на протяжении 12 часов хроматограмму вы­сушивали и затем подвергали хроматографированию во втором направлении в течение 4 часов. Двумерную хроматограмму высушивали и рассматривали в УФ-свете, отмечая положение и цвет пятен до и после обработки хромато­граммы парами аммиака и затем определяли подвижность веществ, вычисляя величины R_f (табл. 4.3). При этом обнаружено 16 веществ, 6 из которых по окраске в УФ свете до и после обработки аммиаком и значению Rf предвари­тельно отнесены нами к флавоноидам, 3 - к гидроксикоричным кислотам, 3 - к кумаринам.

Для идентификации веществ, обнаруженных на двумерных хромато­граммах, также проводили одномерное хроматографирование с использова­нием веществ-свидетелей.

Настойку наносили капилляром на линию старта хроматографической бумаги Filtrak FN-4 (30-40 касаний капилляром). Рядом на расстоянии 2,5 см на линию старта наносили вещества-свидетели: гиперозид и арбутин (по 10 касаний капилляром), которые предварительно растворяли в 70% этаноле. Вещества наносили таким образом, чтобы диаметр пятна не превышал 7 мм.

Хроматографическое разделение осуществляли восходящим способом в 15% уксусной кислоте. Готовую хроматограмму вынимали, сушили и рас­сматривали в УФ-свете, отмечая положение и цвет пятен до и после обработ-

Таблица 4.3

Результаты двумерной хроматографии на бумаге фенольных соединений матричной настойки

Системы растворителей:

1-е направление - н-бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:2, П-е направление — 15% уксусная кислота.

ки хроматограммы парами аммиака. Затем определяли подвижности веществ, вычисляя величины Rf. В результате обнаружили два пятна, флюоресцирую­щих коричневым цветом: пятно 1, более яркое - вещество-свидетель (гиперо­зид R_f 0,51), пятно 2, менее яркое, R_f 0,51 - матричная настойка. Затем хрома­тограмму обрабатывали 10% спиртовым раствором щелочи и затем реакти­вом Паули по Кутачеку [217]: стрептоцида белого 3 г, н-бутанола 14 мл, хло­ристоводородной кислоты концентрированной 6 мл, воды очищенной до 200 мл; перед использованием добавляли натрия нитрит кристаллический. После высушивания на хроматограмме детектировали 2 пятна розового цвета: пятно 1, более яркое, - вещество-свидетель (арбутин Rf 0,885), пятно 2, более свет­лое, Rf 0,893 - матричная настойка. Таким образом, нами подтверждено нали­чие гиперозида и арбутина в матричной настойке (табл. 4.4).

Для обнаружения кумаринов хроматографическое разделение осуществ-

- Ill -

Таблица 4.4

Результаты одномерной восходящей хроматографии фенольных соеди­нений матричной настойки с использованием веществ-свидетелей

ляли нисходящим способом после импрегнирования бумаги смесью форма­мида с 96% спиртом этиловым (1:4) в системе бензол-этилацетат-уксусная кислота в соотношении 50:50:1.

Таблица 4.5

Результаты одномерной нисходящей хроматографии матричной настойки с использованием веществ-свидетелей

Следовательно, подтвердили наличие скополетина в матричной настойке.

Для обнаружения веществ фенольной природы и изучения возможно­сти экспресс-анализа матричной настойки нами проведена тонкослойная хроматография [220,230].

Настойка наносилась нами на стартовую линию хроматографической пластинки «Силуфол» (15>